一、實驗背景

搖瓶培養：玻璃三角瓶内傳代培養，30ml搖瓶接種密度是：0.8×10E6 cells/ml，傳代時(shí)間兩天左右
搖瓶産量：密度每天倍翻，一般長(cháng)到在4-6×10E6，30ml，最高(gāo)長(cháng)到6-8×10E6，表達量200-300ug/ml左右，擴大(dà)體積培養後蛋白産量下(xià)降。
二、培養條件（實際操作中的(de)控制參數）
設備型号：BioWill™Lab-5L生物(wù)反應器             
細胞名稱（注明(míng)來(lái)源）：CHO工程細胞，自己轉染構建的(de)
蛋白名稱（注明(míng)胞内或分(fēn)泌）：一種融合蛋白，胞外分(fēn)泌型
接種細胞數：0.8×10E6 cells/ml，1000ml
細胞生長(cháng)期培養液（糖含量）：HyQ SFM4CHO，6.74g/L
接種後細胞維持培養液：
細胞生長(cháng)期DO：50%                     
細胞生長(cháng)期pH ： 7.2               
細胞生長(cháng)期T：37℃                      表達期T：34℃
轉速度：60rpm
細胞培養期：  共6天
表達培養期：共4天
收獲體積：3L
三、簡述過程
   接種過程：準備好細胞種子密度爲0.8×10E6 cells/ml，活率90%，1000ml打入接種瓶内，置于37度培養箱内。在層流罩連上接種瓶打入種子細胞，留少許檢菌，設置好參數，啓動自動運行狀态，每天根據細胞密度、殘糖量、滲透壓補加培養基、濃縮液和(hé)堿。
   表達過程：到後期，細胞密度和(hé)體積到達要求後，降溫轉表達。
四、培養的(de)耗糖檢測：
 

 

耗糖曲線圖（附上曲線圖）：

 
五、蛋白表達檢測：
1、每天取樣後做(zuò)ELISA檢測蛋白表達曲線如下(xià)

 
六、實驗總結與分(fēn)析（實驗中出現的(de)問題及解決方法）
1、細胞培養過程中每天取樣，觀察細胞狀态，檢測殘糖及滲透壓，計數及活率，根據細胞密度及耗糖補加培養基和(hé)濃縮液。細胞增殖正常，活率正常。
2、蛋白表達伴随整個(gè)細胞生長(cháng)過程，當活率低于80%時(shí)收獲下(xià)罐，以免其他(tā)代謝雜(zá)質增多(duō)不利于後期蛋白分(fēn)離純化(huà)。
3、在生物(wù)反應器上擴大(dà)培養後，細胞達到體積大(dà)規模的(de)同時(shí)密度明(míng)顯提高(gāo)，且工藝參數（相比于搖瓶）控制更穩定，表達量也(yě)能明(míng)顯提高(gāo)。
4、後期補加的(de)培養基及濃縮包，由于配制放置時(shí)間過久，可(kě)能多(duō)肽及谷氨酰胺等營養物(wù)質有部分(fēn)分(fēn)解，導緻影(yǐng)響後期細胞生長(cháng)及蛋白表達，存在進一步優化(huà)工藝的(de)空間。
七、客戶意見（針對(duì)産品或需要改進的(de)地方）
1、滿意。
2、由于客戶工藝信息需要保密，部分(fēn)數據删除，本總結僅做(zuò)工藝分(fēn)析總結用(yòng)。