用(yòng)BioWill™SUS-50L生物(wù)反應器培養Marc-145細胞并接種PRRSV，檢測毒價
二、培養條件（實際操作中的(de)控制參數）
設備型号：BioWill™SUS-50L生物(wù)反應器   
紙片載體：800g
細胞接種量：8*10E9 cells（9個(gè)10L轉瓶的(de)細胞）
1、細胞生長(cháng)液：DMEM+8%FBS+1%PS
細胞生長(cháng)期DO：50%
細胞生長(cháng)期pH ：7.2
細胞生長(cháng)期T：37℃
       培養時(shí)間：96h
2、接種藍耳病毒培養
細胞維持液：DMEM（高(gāo)糖）+2%FBS+1%PS
病毒繁殖生長(cháng)期DO：60%
病毒繁殖生長(cháng)期pH：7.4
病毒繁殖生長(cháng)期  T：35℃
       接毒量：TCID₅₀爲6.5的(de)種毒1000ml，MOI：
       培養時(shí)間：48h
三、簡述培養過程
接種/培養過程：打出罐内浸泡電極和(hé)紙片載體的(de)無菌PBS，打入培養基40L，調節合适參數，預培養24h做(zuò)無菌檢驗。接種種細胞，并測原始糖濃度；接種後每24h測糖，48h時(shí)開始每天換液來(lái)維持細胞生長(cháng)，根據耗糖量進行換液量。
接毒/培養過程：将培養基打出，然後将含2%血清的(de)培養基40L打到反應器中并加熱(rè)到35℃，TCID50爲6.5的(de)種毒1000ml反應器接毒，接毒24h後取樣測糖，根據實際情況補加糖和(hé)濃縮包。
取樣/收毒過程：接毒24h取樣測糖、毒價，每隔2h取毒樣一次，每次取凍存2份；細胞病變脫落開始收毒凍融。
四、培養的(de)耗糖檢測：
     實驗數據如下(xià)：

時(shí)間h	耗糖量g/d	耗堿量L/d	備注
0	0	0	接種細胞
24	40	0.35
48	93	0.79	換生長(cháng)液30L
72	116	1.56	換生長(cháng)液40L
96	140	1.81	換維持液40L，接毒1L
120	157	2.24	補（2*DMEM+150g糖/瓶）1L
144	146	1.96	補（2*DMEM+150g糖/瓶）0.7L

耗糖曲線圖如下(xià)：
 
耗堿曲線圖如下(xià)：
 
 
五、總結與分(fēn)析（出現的(de)問題及解決方法）
（一）結果
接毒毒價檢測結果：

時(shí)間 （h）	種毒	26	30	32	34	36	38	40	42	44	48
滴度	6.5			7.37	7.9	8.5	8.03	7.0

 
注：   紅色數字爲毒價最高(gāo)點
 
（二）分(fēn)析
     1、整個(gè)培養過程共用(yòng)：生長(cháng)液110L，維持液40L，雙抗1.2L，谷氨酰胺1L，血清9.6L，濃縮液1.7L，堿8.71L，葡萄糖300g，收獲毒液45L，最高(gāo)毒價在36h爲8.5。
    2、本次使用(yòng)的(de)種毒毒價爲6.5，最高(gāo)毒價出現在36h，爲8.5。病毒滴度顯著提高(gāo)。
3、本次反應器細胞準備期間，使用(yòng)的(de)爲草(cǎo)原綠野特級新生牛血清，上罐前細胞狀态正常，耗糖正常，上罐後血清量爲8%，維持液爲2%。
 
（三）問題及解決辦法    
    由于客戶工藝信息需要保密，故部分(fēn)數據做(zuò)删除。