細胞培養常見問題及回答(dá)
時(shí)間是：2021-10-15 06:25:00 點擊次數：555
細胞培養常見問題及回答(dá)
1. 谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎？它在溶液中不穩定嗎？
L－谷氨酰胺在細胞培養時(shí)是重要的(de)。脫掉氨基後，L－谷氨酰胺可(kě)作爲培養細胞的(de)能量來(lái)源、參與蛋白質的(de)合成和(hé)核酸代謝。L－谷氨酰胺在溶液中經過一段時(shí)間後會降解，但是确切的(de)降解率一直沒有最終确定。L－ 谷氨酰胺的(de)降解導緻氨的(de)形成，而氨對(duì)于一些細胞具有毒性。
2. 什(shén)麽培養基中可(kě)以省去加酚紅？
酚紅在培養基中被用(yòng)來(lái)作爲PH 值的(de)指示劑：中性時(shí)爲紅色，酸性時(shí)爲黃(huáng)色，堿性時(shí)爲紫色。研究表明(míng)，酚紅可(kě)以模拟固醇類激素的(de)作用(yòng)（特别是雌激素）。爲避免固醇類反應，培養細胞，尤其是哺乳類細胞時(shí)，用(yòng)不加酚紅的(de)培養基。由于酚紅幹擾檢測，一些研究人(rén)員(yuán)在做(zuò)流式細胞檢測時(shí)，不使用(yòng)加有酚紅的(de)培養基。
3. 用(yòng)台盼蘭計數活細胞？
用(yòng)無血清培養基把細胞懸液稀釋到 200－2000 個(gè)/毫升，在 0.1 毫升的(de)細胞中加入 0.1 毫升的(de) 0.4％的(de)台盼蘭溶液。輕輕混勻，數分(fēn)鐘(zhōng)後，用(yòng)血球計數闆計數細胞。活細胞排斥台盼蘭，因而染成藍色的(de)細胞是死細胞。
4. 消除組織培養的(de)污染？
當重要的(de)培養污染時(shí)，研究者可(kě)能試圖消除或控制污染。首先，确定污染物(wù)是細菌、真菌、支原體或酵母， 把污染細胞與其它細胞系隔離開，用(yòng)實驗室消毒劑消毒培養器皿和(hé)超淨台，檢查 HEPA 過濾器。
高(gāo)濃度的(de)抗生素和(hé)抗黴菌素可(kě)能對(duì)一些細胞系有毒性，因而，做(zuò)劑量反應實驗确定抗生素和(hé)抗黴菌素産生毒性的(de)劑量水(shuǐ)平。這(zhè)點在使用(yòng)抗生素如兩性黴素B 和(hé)抗黴菌素如泰樂(yuè)菌素時(shí)尤其重要。下(xià)面是推薦的(de)确定毒性水(shuǐ)平和(hé)消除培養污染的(de)實驗步驟。
（1） 在無抗生素的(de)培養基中消化(huà)、計數和(hé)稀釋細胞，稀釋到常規細胞傳代的(de)濃度。
（2） 分(fēn)散細胞懸液到多(duō)孔培養闆中，或幾個(gè)小培養瓶中。在一個(gè)濃度梯度範圍内，把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如，兩性黴素B 推薦下(xià)列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
（3） 每天觀測細胞毒性指标，如脫落，出現空泡，彙合度下(xià)降和(hé)變圓。
（4） 确定抗生素毒性水(shuǐ)平後，使用(yòng)低于毒性濃度 2－3 倍濃度的(de)抗生素的(de)培養液培養細胞 2－3 代。
（5） 在無抗生素的(de)培養基中培養細胞一代。
（6） 重複步驟 4。
（7） 在無抗生素的(de)培養基中培養 4－6 代，确定污染是否以已被消除。
7. 爲什(shén)麽儲存在冰箱中的(de)胎牛血清會出現沉澱？
GIBICO 的(de)胎牛血清 沒有預老化(huà)，儲存在 2－8℃時(shí)，血清中的(de)各種蛋白和(hé)脂蛋白（如冷(lěng)凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可(kě)能聚集而形成沉澱或可(kě)見的(de)混濁。這(zhè)應該不會影(yǐng)響血清的(de)質量。推薦在－20℃儲存胎牛血清，避免反複凍融。
8. 離子抑制胰蛋白酶活性嗎？使用(yòng)胰蛋白酶時(shí)加入 EDTA 的(de)目的(de)是什(shén)麽？ 二價離子的(de)确抑制胰蛋白酶活性。EDTA 用(yòng)來(lái)螯合遊離的(de)鎂離子和(hé)鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的(de)活性。建議(yì)胰蛋白酶處理(lǐ)細胞前，用(yòng) EDTA 清洗細胞，以消除來(lái)自培養基中所有的(de)二價離子。
10.胞培養的(de)最适 PH 值和(hé)滲透壓是多(duō)少？
生長(cháng)培養基的(de)PH 值對(duì)細胞的(de)增值和(hé)病毒或重組蛋白的(de)生産均會産生影(yǐng)響。對(duì)于大(dà)部分(fēn)鱗翅類昆蟲細胞系， 在 PH 值 6.0－6.4 範圍的(de)大(dà)部分(fēn)應用(yòng)效果良好。培養鱗翅類昆蟲細胞系時(shí)，培養基的(de)最适滲透壓是 345－
380mOsm/kg.。爲保證可(kě)靠和(hé)持久的(de)細胞培養方式，減少技術問題，保持 PH 值和(hé)滲透壓在以上所列的(de)範圍之内。
